提高
液相色譜中柱效的有效途徑有:減小填料粒徑,增加色譜柱長,使用盡量大小均一、外型規則的填料,使用合適的流速,使用合適的流動相組成,使用合適的固定相。
高效液相色譜的工作方式:
在柱層析中,溶劑在重力作用下滴入裝有吸附劑的色譜柱中。高效液相色譜是一種改進的柱色譜。在高達400個大氣壓的高壓下,泵輸送溶劑通過色譜柱。柱吸附劑或固定相通常是由固體顆粒(如二氧化硅或聚合物)制成的顆粒材料。
與柱色譜相比,利用泵輸送,不僅可以快速分析,而且可以使用更小的顆粒作為柱填料。粒子越小,其表面積更大,通過固定相與流動相及樣品組分之間的相互作用,可以更好地實現混合物中各組分分離。流動相通常是溶劑(如水、乙腈、甲醇)的混合物。
混合物的組分由于與吸收劑顆粒的相互作用的程度不同而彼此分離,在此過程中不同組分的洗脫速率不同,從而導致組分流出色譜柱時分離。與柱色譜相比,高效液相色譜自動化程度高,靈敏度高。
液相色譜柱柱體積計算同圓柱體體積計算:
具體計算過程如下:
1、可將液相色譜柱近似看成一個圓柱體,圓柱體體積計算公式為V=π*r*r*h,其中r為液相色譜柱的半徑,h為液相色譜柱的長度(即圓柱體的高)。
2、液相色譜柱型號為4.6x250mm:則代表內徑(直徑)=4.6mm,則半徑=2.3mm,長度=250mm,所以其柱體積為V=3.14*2.3*2.3*250=4152.6立方毫米,換算成ml為4.15265ml,即液相色譜柱4.6x250mm的一個柱體積為4.15265ml(在基本不考慮柱死體積的情況下)。
3、液相色譜柱4.6x250mm的30個柱體積為4.15265ml*30,為124.5795ml,約124.6ml(在基本不考慮柱死體積的情況下)。